항암제를 투여한 세포주의 배양액에서 M30을 이용한 고사의 측정
Measurement of apoptosis using M30 in culture media of cell lines treated with anti‐cancer agents
박상호(가톨릭대학교 성모병원 임상의학연구소); 곽현성(가톨릭대학교 의과대학 산부인과학교실); 류기성(가톨릭대학교); 이영(가톨릭대학교); 한구택(가톨릭대학교)
53권 5호, 401~409쪽
초록
목적: 부인종양에서 실시되는 신보조항암화학요법의 효율성을 증가시키기 위해서는 약제들에 대한 반응을 조기에 예측할 수 있는 측정법이 절실히 요구되고 있다. 본 연구에서는 부인종양의 치료에 흔히 사용되는 항암화학요법제의 투여 후에 배양된 세포들과 이들의 배양액내에서 유발된 고사의 정도를 M30 항원을 이용하여 측정함으로써 약제에 대한 반응의 생화학적 지표로서 사용 가능성이 있는지를 알아보았다. 연구 방법: 배양한 HeLa와 OVCAR-3 세포주에 paclitaxel, cisplatin 및 camptothecin의 저농도와 고농도를 각각 투여한 후 수확한 세포들과 배양액내에서 면역형광염색법과 ELISA에 의해 M30 항원을 측정하였다. 결과: 세포질과 배양액내에서 M30 항원의 정도를 각각 측정한 결과는 비투여 대조군으로부터 항암요법제의 투여 농도가 저농도와 고농도로 증가됨에 따라 M30 항원의 수준이 점차적으로 유의하게 증가함을 관찰하였다. HeLa와 OVCAR-3 세포들에서 M30-fluoresein isothiocyanate (FITC)의 면역형광이 양성인 세포들은 대조군에서 각각 4.3%와 4.07%였다. 약제의 농도 (저농도 vs 고농도)에 따라 paclitaxel의 경우에는 18.61%와 18.6% vs 34.87%와 32.63%로 증가되었고, cisplatin의 경우에는 17.87%와 16.83% vs 32.38%와 32%로 증가되었으며, camptothecin의 경우에는 17.87%와 16.83% vs 32.38%와 32%로 점차 유의하게 증가하는 모습이 괄찰되었다 (P<0.001). 또한 HeLa와 OVCAR-3 세포들의 배양액내에서 ELISA에 의해 측정된 M30 항원의 값은 대조군에서 각각 53.03 U/L와 86 U/L이었다. 약제의 농도 (저농도 vs 고농도)에 따라 paclitaxel의 경우에는 101.53 U/L와 114 U/L vs 355.59 U/L와 412.04 U/L이었고, cisplatin의 경우에는 79.84 U/L와 125.44 U/L vs 327.64 U/L와 385.09 U/L이었으며, camptothecin의 경우에는 88.41 U/L와 108.42 U/L vs 295.005 U/L와 263.1 U/L로 증가함을 관찰하였다 (P<0.001). 결론: 본 연구를 통해 HeLa와 OVCAR-3 세포주에서 paclitaxel, cisplatin과 camptothecin을 투여한 후 수확한 세포들과 배양액내에서 고사의 지표로서 측정한 M30 항원이 증가한 결과들은 암세포의 항암요법제에 대한 감수성의 조기 평가에 유용할 것으로 생각되었다.
Abstract
Objective: We investigated a possible use of the induced apoptosis as a biomarker in the cells and their media treated with commonly used anti-cancer agents in gynecologic malignancies. Methods: After treatments with low and high concentrations of paclitaxel, cisplatin, and camptothecin in HeLa and OVCAR-3 cells, the levels of M30 antigen were detected in the cells and their media by immunofluorescence staining and ELISA methods, respectively. Results: The percentages of M30-fluoresein isothiocyanate (FITC) positive cells in HeLa and OVCAR-3 cells treated with paclitaxel, cisplatin, and camptothecin were 4.3% vs 18.1% vs 34.87% and 4.07% vs 18.6% vs 32.63%, 4.3% vs 17.87% vs 32.38% and 4.07% vs 16.83% vs 32%, and 4.3% vs 16.75% vs 31.3% and 4.07% vs 15.18% vs 29.9% in control, low dose, and hight dose groups, respectively (P<0.001). M30 antigen levels (U/L) measured in culture media of HeLa and OVCAR-3 cells treated with paclitaxel, cisplatin, and camptothecin were 53.03 vs 101.53 vs 355.59 and 86 vs 114.41 vs 412.04, 53.03 vs 79.84 vs 327.64 and 86 vs 125.44 vs 385.09, and 53.03 vs 88.41 vs 295.005 and 86 vs 108.42 vs 263.1 in control, low dose, and hight dose groups, respectively (P<0.001). Conclusion: Our results obtained in this preclinical study suggests that measurement of the levels of M30 antigen may help to predict the clinical responses and to select the effective anti-cancer agents in clinical settings, rapidly and quantitatively.
- 발행기관:
- 대한산부인과학회
- 분류:
- 산부인과학